Desmin Myopathy, miopatia szkieletowa z kardiomiopatią spowodowaną mutacjami w genie Desmina ad 6

Możliwość alternatywnego ojcostwa została wykluczona w drodze oceny za pomocą baterii markerów mikrosatelitarnych. Żaden z prawidłowych pacjentów nie miał żadnej z wyżej wymienionych zmian w genie desminy, co wskazuje, że te mutacje nie są polimorfizmami. Mutacje desminy zostały również wykluczone w pozostałych czterech rodzinach z miopatiami myofibrylarnymi, które badaliśmy, w oparciu o sekwencjonowanie cDNA i wszystkich dziewięciu eksonów amplifikowanych z genomowego DNA. Nie zidentyfikowano również mutacji w genie .B-krystaliny.
Badania ekspresji in vitro
Figura 3. Figura 3. Linie komórkowe SW13 (wimentyna-ujemne) transfekowane konstruktem plazmidowym zawierającym sekwencję cDNA normalnego desminy lub sekwencję cDNA zmutowanego allelu z probandu w rodzinie 2. W panelach A i B, komórki były wybarwione z przeciwciałem przeciwko normalnej desminie za pomocą techniki pośredniej immunofluorescencji. Normalny desmin tworzy dobrze skonstruowaną sieć włókien ciągłych (panel A). W przeciwieństwie do tego, komórki transfekowane zmutowanym desminantem (A360P) nie mogą tworzyć sieci nitkowatej, lecz tworzą rozproszone agregaty desminy (panel B). Pasek reprezentuje 20 .m. Badanie pod mikroskopem elektronowym tych samych komórek potwierdza tworzenie agregatów tylko w komórkach transfekowanych zmutowanym desmina (panel D, x 16 000), a nie w komórkach transfekowanych normalną sekwencją desminy (panel C, x 20 000). We wszystkich komórkach transfekowanych każdą ze zidentyfikowanych zmutowanych sekwencji desminy za wyjątkiem mutacji missens C-to-G w kodonie 451 w rodzinie 3 (tabela 2), agregaty przypominały te widziane w próbkach z biopsji mięśni. (Przykład pokazano na ryc. 1D.)
Komórki SW13 (ujemne pod względem wimentyny) transfekowane normalnym białkiem desminy tworzyły rozległe sieci włókienkowych cytoplazmatycznych, które były dodatnie dla desminy (Figura 3A). Komórki transfekowane wektorem ekspresyjnym zawierającym każdy zmutowany desmina nie wytwarzały wewnątrzkomórkowej sieci włókienkowych, ale tworzyły agregaty desminy i dodatków rozproszone w cytoplazmie (Figura 3B). W mikroskopie elektronowym (ryc. 3C i ryc. 3D) agregaty te przypominały nagromadzenie obserwowane w próbkach biopsji mięśniowej (ryc. 1D). Komórki transfekowane dwoma zmutowanymi desminami z rodziny 2, które miały dwie zmiany w genie desminy, nie wytworzyły sieci pośrednich filamentów. Nie stwierdzono widocznych różnic jakościowych w badaniach ekspresji wśród zidentyfikowanych mutacji, z wyjątkiem mutacji w kodonie 451, co doprowadziło jedynie do łagodnego upośledzenia sieci włókienkowych.
Korelacje między fenotypem a genotypem
Rysunek 4. Rysunek 4. Wtórna struktura ludzkiego układu pokarmowego i umiejscowienie mutacji związanych z miopatią serca i układu kostnego. Pudełka wskazują cztery zachowane poddomeny. Helikalne (1A, 1B, 2A i 2B), które są oddzielone nieheterycznymi łącznikami. Spiralna domena pręta jest flankowana przez niehezyjną domenę końca aminowego (głowa) i domenę końca karboksylowego (ogon). Większość zidentyfikowanych mutacji punktowych znajduje się w karboksy-końcowej części 2B (strzałki). Mutacja delecyjna zidentyfikowana w Patencie 6, znajdująca się w poddomenie 1B, doprowadziła do delecji egzonu 3 w wyniku substytucji guaniny za adeninę w trzecim nukleotydzie miejsca donorowego splicingu w intronie 3 (IVS3 + 3A . G)
[więcej w: komora trzecia, riwaroksaban, cystatyna ]
[podobne: gim2, sp3 siemianowice, uzupełnij zapis cząsteczkowy równań reakcji metali z kwasami ]